拟南芥(Arabidopsis thaliana)miR396分子对类神经酰胺酶基因表达的负调控

摘要

以拟南芥(Arabidopsis thaliana)miR396小分子为研究对象,分别克隆到了miR396小分子的两个前体(MIR396a,MIR396b),得到转基因植株后,通过Microarray分析、Northern杂交以及遗传学分析的方法探讨了miR396与拟南芥类神经酰胺酶基因的关系.对miR396高表达转基因植株进行Microarray分析的结果表明,拟南芥类神经酰胺酶基因(Atceramidase-likel,Atceramidase-like2)在miR396高表达转基因植株中的表达与空载体转基因植株相比下降2倍以上,而4-alpha-乳糖基神经酰胺半乳糖转移酶则增加2倍以上.Northern杂交结果进一步验证了Microarray分析的结果,即在miR396高表达转基因植株中,拟南芥类神经酰胺酶基因的成员Atceramidase-likel和Atceramidase-like2表达水平均显著降低(分别减少6.8倍和2倍以上),而Atceramidase-like3的表达水平在35S:MIR396a转基因植株叶中有所下降,在35S:MIR396b转基因植株叶中变化不明显.相反地,在35S:MIR396a和35S:MIR396b转基因植株叶中,miR396表达水平分别比空载体转基因植株增加2倍以上.上述研究结果说明拟南芥miR396能有效地负调控CPramidase-likel和Ceramidase-like2等基因的表达水平.