小干扰RNA对类风湿关节炎相关的人白细胞抗原-DRB1* 0405蛋白表达的抑制作用

摘要

目的探讨人类白细胞抗原（HLA）DRB1*0405小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对类风湿关节炎（RA）相关的HLA-DRB1*0405蛋白表达的影响。方法构建HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒siCHECKTM-2/HLA-DRB1*0405,同时针对HLA-DRB1*0405基因序列设计并构建6个小发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达质粒和1个针对无关序列的shRNA表达质粒。脂质体瞬时共转染两种质粒至人胚胎肾细胞293,以仅转染HLA-DRB1*0405蛋白表达质粒作为阴性对照,采用实时荧光定量PCR检测293细胞中HLA-DRB1*0405mRNA的表达,通过测定荧光素酶强度分析293细胞中HLA-DRB1*0405蛋白水平。结果所设计的6个HLA-DRB1*0405siRNA可不同程度的抑制HLA-DRB1*0405在293细胞中的表达,对mRNA水平,其抑制率最高可达89·25%,而在蛋白水平,其抑制率达46·70%。结论质粒介导的HLA-DRB1*0405siRNA可明显抑制HLA-DRB1*0405在人胚胎肾细胞株293中的表达,为利用RNA干扰（RNA interference,RNAi）抑制RA中HLA-DRB1介导的异常免疫反应提供了试验依据。