响应面法优化重组巴斯德毕赤酵母合成ECH42的培养基组分及其重组酶降解几丁质的研究

摘要

采用响应面法在摇瓶水平对重组巴斯德毕赤酵母合成内切几丁质酶的培养基组分进行优化,并探讨重组内切几丁质酶降解几丁质的最佳反应条件.首先对培养基中显著影响内切几丁质酶活力的关键组分通过Plackett-Burman试验设计进行筛选;然后通过Box-Behnken试验设计和响应面法确定关键组分的最佳浓度.结果 筛选出3个具有显著效应的关键组分为酵母膏、油酸和吐温-80,最佳浓度分别为:2.45％、0.17％和0.62％.优化后的最佳培养基组成为:2.45％酵母膏、2.00％蛋白胨、0.50％酵母氮碱(YNB)、0.50％甲醇、0.17％油酸、0.62％吐温-80和0.40％ PTM1.在该培养基中,重组巴斯德毕赤酵母在摇瓶水平(25mL/250mL)发酵生产内切几丁质酶的活力高达92.26U/mL.重组内切几丁质酶催化几丁质降解的最佳反应条件为:粉末几丁质浓度为4％,pH和温度分别为7.0和30℃,反应时间为10h.研究结果为后期在发酵罐中大规模生产内切几丁质酶和几丁寡糖提供了基础.