球孢白僵菌丝氨酸蛋白酶基因CDEP-1在毕赤酵母中的表达

摘要

我们从球孢白僵菌中克隆了丝氨酸蛋白酶Pr1类基因CDEP-1.为明确CDEP-1的功能、评价其在害虫生物防治中的潜力,需要大量制备具有生物活性的CDEP-1编码蛋白.由于大肠杆菌系统表达真核基因存在产物复性困难的问题,本文利用毕赤酵母系统来表达CDEP-1.结果表明,CDEP-1可在毕赤酵母中高效的分泌表达,而且产物活性高,甲醇诱导48h后上清液中的酶活即可达到38,266U/L.诱导表达的上清液经浓缩后进行凝胶过滤层析,得到了CDEP-1的初纯品,蛋白质含量为50mg/L.将纯化的蛋白酶CDEP-1免疫家兔,制备了CDEP-1的抗血清.Western blotting分析表明,制备的抗血清可特异性地检测CDEP-1.