基于BMP-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠BMSCs增殖和成骨分化的影响

摘要

目的 基于BMPs-Smad/RUNX2信号通路探讨固本增骨方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用机制.方法 制备固本增骨方含药血清;台盼蓝染色观察细胞生长情况;取P3代大鼠BMSCs分为空白血清组、5％、10％、20％、30％浓度含药血清组及传统诱导组,分别对各组大鼠BMSCs进行培养及成骨诱导,向6组加入相应培养液24 h后开始测量细胞计数,连续测量4天;成骨诱导2周后,进行碱性磷酸酶染色试剂盒说明书进行染色,光镜下观察各组细胞蓝紫色区域的密集程度;ELISA法检测COL-Ⅰ、ALP、BGP、OPN蛋白的含量;Real-time PCR检测BMPs信号通路相关基因BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2表达.结果 各组固本增骨方含药血清组在培养24h后比空白组及传统成骨诱导组OD值比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),并且20％含药血清组较5％、10％及30％含药血清组OD值比较差异具有统计学意义(P＜0.05);碱性磷酸酶染色后镜下观察在浓度为20％时染色区域最密集;5％、10％、20％含药血清组与其他各组BGP、OPN、ALP、COL-Ⅰ含量比较差异具有统计学意义(P＜0.05),且20％含药血清组与5％、10％含药血清组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);20％含药血清组与其他各组BMP2、BMP4、Smad1、RUNX2mRNA表达比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 固本增骨方能促进BMSCs的增殖,并且能促进成骨标志蛋白BGP、OPN、ALP、COL-Ⅰ蛋白含量的增加,且在20％浓度为最佳,这个机制可能是激活了BMP-Smad/RUNX2信号通路实现的.