利用干细胞筛选中药神经保护作用活性成分的新方法

摘要

目的:利用干细胞构建可用于药物筛选的细胞模型,初步建立寻找中药活性成分的新方法。方法:首先,克隆神经生长因子(NGF)启动子的序列,连接到含有荧光素酶报告基因/E2红色荧光蛋白的质粒上,并将合成得到的质粒转入HEK-293细胞中,构建基于启动子的初步筛选稳定的细胞模型。使用阳性药进行验证细胞模型的准确性,并用该模型筛选来自中药的小分子化合物。然后使用筛选得到的化合物诱导大鼠的骨髓间充质干细胞,检测相关神经营养因子的转录水平,验证待测小分子化合物可能对神经生长的生物活性。结果:来自中药益智的三种化合物,白杨素、圆柚酮和杨芽黄素均可以激活NGF启动子。白杨素、圆柚酮诱导MSC不同时间后,细胞表面神经标志物:神经生长因子(NGF)、半乳糖神经酰胺(GalC)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、波形蛋白(Vimentin)对应RNA的转录水平均有不同程度的提高。而杨芽黄素没有明确促进神经细胞分化的活性。结论:白杨素、圆柚酮可以促进干细胞向神经细胞分化,是中药益智发挥神经保护作用物质基础的组成部分。