端粒酶逆转录酶小干扰RNA对胰腺癌Capan-2细胞抑制作用的实验研究

摘要

目的 探讨RNA干扰(RNAi)对胰腺癌Capan-2细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的抑制效应.方法 化学合成靶向于hTERT基因的4个小分子干扰RNA(siRNA)序列,用阳离子脂质体为载体转染Capan-2细胞,分为siRNA1 ～ SinRNA 4、siRNA阴性对照和空白对照6组.通过RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测胰腺癌细胞转染后细胞hTERT mRNA和蛋白水平,并用MTS法检测细胞生长增殖.结果 siRNA1～siRNA 4组hTERT mRNA相对表达量分别为0.51±0.22,0.56±0.19,0.44±0.13和0.89±0.21,端粒酶相对活性分别为0.60±0.15,0.63±0.16,0.17±0.12和0.72±0.16,hTERT蛋白相对表达量分别为0.47±0.21,0.52±0.19,0.10±0.11和0.84 ±0.15,其中siRNA1 ～ siRNA3 3组的hTERT mRNA表达量、端粒酶活性和蛋白表达量与空白对照组比较有显著性差异(P均＜0.05).siRNA1～siRNA44组Capan-2细胞在转染后48 h时的细胞增长平均抑制率分别为50％,54％,63％和18％.不同siRNA序列对Capan-2的转染效率不同,其中siRNA3组能显著下调hTERT mRNA和蛋白的表达水平,并能抑制端粒酶活性和促进Capan-2细胞凋亡,与空白对照组比较均有显著性差异(P均＜0.01).结论 靶向hTERT的RNAi能明显抑制Capan-2细胞的增殖,hTERT可作为胰腺癌基因治疗的靶点.