雷公藤甲素致L5178Y细胞及小鼠Pig-a基因突变风险评价

摘要

目的:评价雷公藤甲素(TPL)的潜在致Pig-a基因突变风险.方法:采用小鼠淋巴瘤L5178Y细胞分别进行非S9(-S9)代谢和S9(+S9)代谢条件下体外实验.-S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1％二甲基亚砜)、阳性对照甲基磺酸乙酯(EMS,500μg·mL-1)组和TPL各质量浓度(6.3、12.5、25.0、50.0、100.0 ng·mL-1)组,受试物处理24 h后细胞计数,更换培养基培养8 d,表达结束后进行流式检测.+S9代谢条件实验中,L5178Y细胞分为对照组(1％二甲基亚砜)、阳性对照苯并芘[B(a)P,5μg·mL-1]组和TPL各质量浓度(12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 ng·mL-1)组,受试物处理4 h后更换培养基,24 h后计数,培养8 d,表达结束后进行流式检测.体内Pig-a基因突变实验中,KM小鼠按体质量随机分为对照组(0.5％羧甲基纤维素钠)、阳性对照N-乙基-N-亚硝基脲(ENU,100 mg·kg-1)组和TPL各剂量(50、100、200μg·kg-1)组.ENU组仅于首次给药日给药1次,TPL各剂量组连续给药28 d,分别于给药前和首次给药后14、28、42、56 d于小鼠眼内眦采血,血样经缓冲液洗脱后,进行anti-CD24-PE和anti-CD61-PE标记,采用免疫磁性分离架进行柱前和柱后样品的收集,利用流式细胞仪对样本进行检测计数,对突变率进行统计分析.结果:体外Pig-a基因突变实验结果表明,在-S9和+S9代谢条件下,与对照组比较,TPL各剂量组Pig-a基因突变率差异无统计学意义,且无剂量依赖性.体内Pig-a基因突变实验结果显示,与对照组比较,TPL组小鼠红细胞(RBC)和网织红细胞(RTC)CD24缺失差异无统计学意义,且无剂量依赖性.结论:TPL质量浓度为200 ng·mL-1及200μg·kg-1以下时不会引起L5178Y细胞及KM小鼠发生Pig-a基因突变.