丹参化学成分及丹参提取物对脂多糖刺激大鼠肝脏枯否细胞内P38和NF-κB信号通路蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨丹参化学成分及丹参提取物对脂多糖（LPS）刺激大鼠肝脏枯否细胞（KC）内P38和核转录因子-κB（NF-κB）信号通路蛋白表达的影响.方法 采用胶原酶消化法自SD大鼠肝脏中分离、培养KC.60 ng/ml LPS作用原代培养的KC 12 h后,加入丹参提取物及分离纯化的丹参化学成分-丹参新醌乙、丹参新酮、丹参醇A、丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅰ、丹参新醌甲、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹参酚酸B各100 μg/ml,以及NF-κB信号通路蛋白特异性阻断剂PDTC、P38通路特异性阻断剂SB239063各100 μg/ml,加上阴性对照组及LPS组共14组.继续培养12 h后,提取各组细胞总蛋白,免疫印记法（Western Blot）检测NF-κB65、磷酸化NF-κB65（p-NF-κB65）、NF-κB抑制蛋白（I κB）、P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）、磷酸化P38MAPK（p-P38MAPK）和c-fos等蛋白的表达.结果 与LPS组相比,PDTC可下调活化KC内p-P38MAPK和p-NF-κBp65的表达,上调NF-κBp65和IκB的表达,而对c-fos和P38MAPK的表达无明显影响;SB239063可下调活化KC内P38MAPK、p-NF-κBp65和c-fos的表达,上调NF-κBp65和IκB的表达,而对p-P38MAPK的表达无明显影响.所有丹参成分和丹参提取物均能不同程度下调活化KC内p-P38MAPK、p-NF-κB65和c-fos的表达,其中以丹参新酮、丹参醇A、丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅰ、丹参新醌甲和隐丹参酮的抑制作用最为明显.结论 对于LPS激活的KC,丹参化学成分和丹参全提取物均可不同程度下调其P38和NF-κB信号通路蛋白的活性,该作用可能是丹参控制肝内炎症反应的主要机制之一.