大鼠精原干细胞培养饲养层的制备

摘要

目的通过分离和培养BALB/C小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）,制备用于大鼠精原干细胞（SSCs）培养的饲养层。方法从胎龄为12.5~14.5 d的胎鼠中分离MEF,经不同浓度（5、10、15 mg/L）丝裂霉素C处理不同时间（1.5、3、4.5 h）,应用噻唑蓝（MTT）法测定其增殖活性。将大鼠SSCs接种到最佳饲养层上培养,观察细胞生长情况。结果从胎龄为12.5~14.5 d的胎鼠中分离培养的MEF数量多,增殖快。常温下,经0.25%胰酶（含0.04%EDTA）处理2~3 min细胞增殖状况良好。经10 mg/L丝裂霉素C处理3 h MEF增殖不明显,与0 d比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 12.5~14.5 d是分离培养小鼠MEF的最佳胎龄,10 mg/L丝裂霉素C作用3 h对MEF的增殖具有良好的抑制作用,有利于大鼠SSCs的培养。