H2S对Graves甲亢小鼠甲状腺功能与甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用及机制

摘要

目的 探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对Graves甲亢(GD)小鼠甲状腺功能的改善情况,及其对甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用.方法 45只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、空载体病毒组和重组腺病毒组,每组15只.通过注射Ad-TSHR289重组腺病毒建立GD小鼠模型,GD造模成功的15只小鼠随机分为模型组、H2S组及甲疏咪唑组,每组5只.H2S组小鼠予以硫氢化钠(NaHS)溶液(56 μmol/kg/d)腹腔注射,甲疏咪唑组小鼠予以甲疏咪唑溶液(3.9mg/kg/d)腹腔注射,正常对照组和空载体病毒组小鼠予以等体积0.9％ Nacl溶液腹腔注射,共干预4周.4周后,测定小鼠血清中促甲状腺激素受体抗体(TRAb)、甲状腺素(T4)和促甲状腺激素(TSH)水平,HE染色观察各组小鼠甲状腺组织的病理变化,免疫组织化学染色检测甲状腺组织增殖细胞核抗原(PCNA)与细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达,Western blot检测钠/碘转运体(NIS)、甲状腺过氧化物酶(TPO)、甲状腺球蛋白(Tg)表达水平.分离培养小鼠甲状腺滤泡上皮细胞,将细胞随机分为正常对照组、H2O2组、NaHS+ H2O2组,正常对照组细胞不进行任何处理,H2O2组使用H2O2溶液处理甲状腺滤泡上皮细胞24 h,NaHS+ H2O2组先用NaHS预处理甲状腺滤泡上皮细胞30 min再用H2O2溶液处理细胞.通过CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况.结果 与正常对照组比较,重组腺病毒组小鼠血清中TRAb和T4水平显著上升,TSH水平显著下降(均P＜0.05).NaHS溶液干预后,GD小鼠血清中TRAb和T4的水平显著下降,TSH水平显著升高(均P＜0.05);甲状腺组织病变得到明显的改善,PCNA与CyclinD1阳性表达显著降低,NIS、TPO与Tg蛋白表达量显著下降(均P＜0.05).与正常对照组比较,H2O2组甲状腺滤泡上皮细胞活性在培养24、48、72 h显著下降,细胞凋亡率显著升高(均P＜0.05);与H2O2组比较,NaHS+ H2O2组细胞在培养48 h和72 h时,甲状腺滤泡上皮细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低(均P＜0.05).结论 气体信号分子H2S对GD小鼠的甲状腺功能减退具有一定的改善作用,机制可能与其抑制PCNA、CyclinD1及NIS、TPO、Tg蛋白表达有关,并对H2O2诱导的甲状腺滤泡上皮细胞损伤具有保护作用.