PE38与人源化抗肝癌单链抗体重组免疫毒素的构建及表达

摘要

目的:构建绿脓杆菌外毒素PE38融合人源化鼠抗肝癌单链抗体(hscFv)原核表达载体,对其产物作初步鉴定,为肝癌的导向治疗奠定基础.方法:采用分子克隆技术,PCR法扩增PE38基因片段,克隆入 GST-融合蛋白表达载体pGEX-4T-1-hscFv中,重组克隆载体经酶切及DNA序列测定证实两片段连接正确,受IPTG诱导表达后,SDS-PAGE及Western blot分析GST融合蛋白结果.结果:成功构建免疫毒素表达载体pGEX-4T-1-hscFv-PE38(以下简称pGEXh-PE38);SDS-PAGE清晰显示Mr为90 000的目的蛋白条带,光密度薄层扫描提示表达量为11%, Western blot在相同位置显示蛋白印迹,证实载体构建及表达均正确.结论:利用基因重组技术,在原核细胞中表达重组免疫毒素hscFv-PE38,为尝试肝癌治疗试验的一条有效途径.