CC类趋化因子受体2对缺氧后小鼠心肌成纤维细胞表型转换的影响

摘要

目的 探讨CC类趋化因子受体2(CCR2)对缺氧后心肌成纤维细胞表型转换的影响.方法 采用胶原酶消化法提取小鼠心肌原代成纤维细胞,将细胞分为对照组、缺氧-24h组和缺氧-48h组,通过定量PCR和Western blotting检测CCR2 mRNA及蛋白表达水平来确定缺氧条件.应用小干扰RNA方法建立CCR2低表达的心肌原代成纤维细胞(si-CCR2),之后将细胞分为转染对照组(si-control)、si-CCR2组、si-control+缺氧组、si-CCR2+缺氧组.应用定量PCR和Western blotting检测CCR2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和胶原1(Col1A)表达;采用CCK8法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测细胞增殖情况.结果 与对照组比较,缺氧-24h组和缺氧-48h组CCR2mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P＜0.01),但两个时间点之间差异无统计学意义(P＞0.05).与si-control组相比,si-CCR2组α-SMA和Col 1A基因mRNA和蛋白水平均无明显变化,而si-control+缺氧组CCR2、α-SMA和Col 1A基因mRNA和蛋白水平均明显升高(P＜0.01或P＜0.05),细胞增殖明显增加(P＜0.01);与si-control+缺氧组相比,si-CCR2+缺氧组α-SMA和Col 1A蛋白表达明显下降(P＜0.05),细胞增殖明显降低(P＜0.05).结论 CCR2可影响缺氧后心肌成纤维细胞的表型转换.