乙肝肝硬化肝组织和外周血自然杀伤细胞的表型及功能特点

摘要

目的 分析乙肝肝硬化患者肝脏和外周血自然杀伤(NK)细胞的表型和功能特点,进一步阐释人NK细胞在肝纤维化进展中的作用.方法 选择2015年1月-2017年1月郑州市第一人民医院与解放军总医院第五医学中心收治的30例乙肝肝硬化患者为研究对象,同时以30例健康人为对照组.所有入组对象均抽取肝素抗凝外周静脉血,其中30例肝硬化患者中有10例通过肝组织穿刺获得肝组织标本,另有8例健康肝组织标本来源于器官捐献供体肝脏.采用流式细胞术分析两组人群肝组织和外周血NK细胞及CD56bright、CD56dimNK细胞亚群的频率、表型(包括活化分子及毒性分子等)和功能特点;通过与肝星状细胞(HSCs)细胞株LX-2共培养观察NK细胞对HSCs的直接杀伤作用.结果 与对照组比较,肝硬化患者肝脏和外周血NK细胞频率明显降低(分别为U=8.5,P=0.006;U=184.0,P＜0.001);活化分子CD69(U=102.0,P=0.009)、HLA-DR(U=82.5,P＜0.001)、CD38(U=0.0,P=0.029)表达明显增高;外周血NK细胞毒性分子Granzyme B的表达明显降低(U=0.0,P=0.004);肝组织内NK细胞除肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达明显增高外(U=4.0,P=0.026),穿孔蛋白、Granzyme A和Granzyme B的表达均呈下降趋势,以穿孔蛋白的下降最明显(U=4.0,P=0.034);肝脏NK细胞分泌干扰素(IFN)-γ的能力明显降低(U=2.0,P=0.032),外周血NK细胞分泌CD107a和IFN-γ的能力明显降低(分别为U=88.0,P=0.018;U=13.0,P＜0.001).纯化外周血NK细胞与LX-2细胞共培养,发现NK细胞诱导LX-2细胞发生早期凋亡(7AAD-Annexin V+)和晚期凋亡(7AAD+ Annexin V+)的比例均显著降低(分别为U=6.5,P=0.025;U=2.0,P=0.002).结论 乙肝肝硬化患者体内NK细胞频率降低,活化水平增高,分泌CD107a和IFN-γ水平降低,杀伤HSCs的能力减弱,提示患者NK细胞抗纤维化功能处于受损状态.