HCV C区、E1区基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-CE1的构建、鉴定及表达

摘要

用分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的HCV CE1基因上、下游引物,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCV CE1基因片段,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd.CMV-Link 1中CMV启动子下游BglⅡ与HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-CE1.通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定,证实了pAd.HCV-CE1插入片段为HCVCE1区基因片段.以抗HCV C单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法证实pAd.HCV-CE1可以在人肝癌细胞7721中瞬时表达.以上结果初步表明,构建的质粒pAd.HCV-CE1可以表达HCV CE1区基因,为进一步包装能高效表达HCV CE1基因的腺病毒载体奠定了基础.