用三甲基甘氨酸克服G+C丰富靶基因的PCR扩增困难

摘要

为探讨三甲基甘氨酸等有机溶剂对G+C碱基丰富基因PCR扩增困难的影响, 分别用标准PCR和添加有甘油、二甲基亚砜(DMSO)、甲酰胺及三甲基甘氨酸的改进型PCR对G+C含量为70%的周期蛋白依赖性激酶抑制剂基因(ARF)和G+C含量为90%的胰岛素样生长因子受体Ⅱ (IGFR Ⅱ)进行扩增.结果显示,应用标准PCR及添加有甘油或甲酰胺的PCR均不能特异性扩出上述两基因;加入10% DMSO虽可扩出ARF基因但同时有非特异性产物;而加入三甲基甘氨酸可特异地扩增出642bp的ARF和540bp的IGFR Ⅱ基因.表明三甲基甘氨酸可消除G+C丰富DNA区域二级结构对PCR扩增的干扰,明显促进这类基因的PCR扩增.