hTERT基因转染对人胚胎成纤维细胞端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响

摘要

为了探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEFs)端粒长度、端粒酶活性及其亚单位的影响,采用基因重组技术构建hTERT全长cDNA正义荧光真核表达载体,并采用脂质体法将正义重组质粒pIRES2-EGFP-hTERT及空载质粒pIRES2-EGFP分别转染原代培养hEFs,检测转染细胞端粒长度、端粒酶活性及端粒酶亚单位的变化.结果显示,外源性hTERT基因转染细胞(hEF-hTERT)端粒酶活性较未转染细胞(hEFs)及空载体转染细胞(hEF-EGFP)显著增加(P＜0.01),hEF-hTERT、hEFs及hEF-EGFP端粒长度分别为6.0kb、5.3kb及5.4kb,端粒酶亚单位中除hTERT在mRNA和蛋白水平表达均增加外,hTR和TP1 mRNA无明显变化.以上结果提示,外源性hTERT基因转染能使原代培养的hEFs端粒酶活化,端粒长度不再继续缩短,hTERT在mRNA和蛋白水平表达增加.