尿Ⅳ型胶原测定的方法学评价及分析前因素对于测定的影响

摘要

目的 对一步法酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行功能评价,建立参考范围并对分析前和可能影响测定的一些因素进行研究.方法 采用ELISA对尿液中的Ⅳ型胶原进行测定.对试剂盒的敏感性,测量线性,精密度,特异性,回收率进行了测定和评价,并进行干扰试验和初步建立参考范围.同时评价分析前因素,包括采样、离心、保存条件和时间,以及冻融和昼夜节律对于测定的影响.结果 该方法具有令人满意的敏感性(0.2ng/ml),测量线性(0.8～50ng/ml),精密度(CV＜7%),特异性和回收率(82.84%～97.45%).精液的污染对于Ⅳ型胶原的测定没有显著影响.尿内Ⅳ型胶原的量呈明显的昼夜节律,晨尿内含量最低,白天含量达到最高,睡前再次下降.Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定,但长时间室温保存也可被各种蛋白酶的降解.冻融对于Ⅳ型胶原的影响不大,但离心可以造成测量值下降.将尿液与一定量的缓冲液(pH7.5的TRIS-HCl)混合(10:1)可以得到一个满意的回收率,避免Ⅳ型胶原被降解.结论 该试剂盒具有良好的性能;Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定,但如需长期保存,应加入缓冲液并在-80℃保存.