人TIMP-1转基因小鼠肾组织内外源基因功能表型的鉴定

摘要

目的对人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)转基因小鼠肾组织内外源人TIMP-1基因的功能表型进行鉴定,为深入研究TIMP-1在肾脏疾病进展过程中的病理生理作用奠定基础.方法3月龄野生型小鼠(n=8,正常组)和hTIMP-1转基因小鼠(n=8)肾组织石蜡切片行PAS染色,观察肾脏组织结构变化.采用Northern杂交、Western印迹方法检测两组小鼠肾组织内h/mTIMP-1、mTIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、MMP-9、MMP-2和COLⅣα5 mRNA及蛋白质表达;明胶酶谱法检测MMP 2、MMP-9的活性.反向酶谱法检测TIMP-1的活性.结果hTIMP-1转基因小鼠与正常组小鼠相比,肾组织结构未见显著变化.与正常组小鼠相比,hTIMP-1转基因小鼠肾组织内h/mTIMP-1mRNA、蛋白表达及活性显著升高(P＜0.05);TIMP 2、MMP-2mRNA和蛋白表达降低(P＜0.05);MMP-9的活性增高(P＜0.05),而MMP-2的活性则降低(P＜0.05).两组小鼠mTIMP 1、TIMP-3、MMP-9和COLⅣα5的mRNA表达没有显著性差异(P＞0.05).结论外源基因在人TIMP-1转基因小鼠肾组织内稳定表达并导致MMPs/TIMPs系统发生代偿性变化.