视黄醇在白血病抑制因子维持小鼠胚胎干细胞未分化状态中的协同作用

摘要

目的 研究视黄醇在白血病抑制因子(LIF)维持小鼠胚胎干细胞(mESC)多潜能性中的协同作用.方法 实验分为两组,在相同LIF浓度(100U/ml)的mESC常规培养基础上,实验组添加视黄醇,对照组则不添加视黄醇.培养14d后,观察两组碱性磷酸酶(ALP)染色情况及mEN2的形态变化,通过RT-PCR及Westem blot检测Oct4和Nanog的mRNA及蛋白表达情况.结果 两组mESC常规培养14d后,实验组78%mESC处于未分化状态,细胞集落形态维持较好,ALP染色强阳性;而对照组中仅有35%mESC处于未分化状态,ALP染色弱阳性;实验组未分化细胞数量(7.02±0.34)明显高于对照组(4.28±0.37,P＜20.05).RT-PCR及Western blot结果显示:实验组Nanog及Oct4的mRNA表达(分别为204.95±11.24,160.69±11.52)均高于对照组(分别为122.89±9.25,88.21±4.69,P＜0.05);实验组Nanog及Oct4的蛋白表达(分别为238.14±14.72、187.16±9.02)均明显高于对照组(分别为205.04±10.03,132.41±15.78,P＜20.05).结论 在中等浓度LIF因子作用时添加视黄醇对维持mESC多潜能性有明显作用.