地西他滨联合丙戊酸钠诱导的骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

摘要

目的 探讨地西他滨(DCA)联合丙戊酸钠(VPA)体外诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226凋亡及对死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因去甲基化的作用.方法 体外培养多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞,实验分为5组:DCA组(选取1.5、3μmol/L 2个浓度),VPA组(选取1、2μmol/L 2个浓度),DCA+VPA组(DCA 3μ mol/L+VPA 2μmol/L),PBS组,阴性对照组.上述细胞分别培养24、72h后,MTT法检测细胞存活情况.培养72h后,透射电镜观察DCA+VPA组细胞凋亡形态；流式细胞仪Annexin V法检测上述5组细胞凋亡率；MSP法检测上述5组细胞(DCA组取3μmol/L浓度,VPA组取2μmol/L浓度)处理前后DAPK基因甲基化状态,半定量RT-PCR方法检测DAPK基因表达情况.结果 处理72h后,DCA+VPA组MTT值下降最明显,细胞存活率降低,与PBS组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；VPA组及DCA组MTT值均下降,DCA 3μmol/L组与PBS组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).处理72h后,DCA+VPA、VPA、DCA组G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,细胞凋亡率增加,DCA+VPA组凋亡率高于DCA组及VPA组(P＜0.05),与PBS组及阴性对照组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).透射电镜下可观察到DCA+VPA组细胞出现核染色质凝聚、固缩、边集、核碎裂等典型的细胞凋亡形态学改变.处理72h后,DCA+VPA、VPA、DCA组细胞DAPK启动子均有去甲基化表现,以DCA+VPA组去甲基化程度为最大,与PBS组及阴性对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).DCA+VPA、VPA、DCA组DAPK基因mRNA表达量均增加,且DCA+VPA组的相对mRNA比值高于其余4组(P＜0.05).结论 DCA联合VPA可诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226凋亡及DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK基因表达恢复.