γ干扰素基因转移的肿瘤细胞克隆株建立及其体内外生长特性的研究

摘要

本文构建了正向连入人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ片段的重组表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏ－γ－ＩＦＮ，大量提取纯化后，以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ为介质将其转染胃癌细胞７９０１中，Ｇ４１８抗性筛选出阳性克隆后，地塞米松诱导其分泌ＩＦＮ－γ，经ＩＦＮ－γ活性测定选出高分泌ＩＦＮ－γ的细胞株ＲｐＭ７９０１７＃（１７２５ＩＵ／ｍｌ），并经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实人ＩＦＮ－γｃＤＮＡ基因确已导入该细胞中。在体外培养过程中，地塞米松诱导前的ＲｐＭ７９０１细胞与转染了对照质粒ｐＭＡＭｎｅｏ的细胞ｐＭ７９０１及野生型７９０１细胞在形态、生长能力等方面皆无明显差别，而经诱导后分泌ＩＦＮ－γ的ＲｐＭ７９０１细胞变得粗糙，胞内颗粒明显增多，有些细胞增大，胞质出现空泡，乃至死亡，细胞生长曲线显示其增殖能力显著减弱，细胞增殖缓慢，且在软琼脂培养中基本不生长。裸鼠体内接种显示，高分泌ＩＦＮ－γ的ＲｐＭ７９０１细胞在致瘤原性上显著低于野生型７９０１细胞及ｐＭ７９０１细胞。结果提示，克隆高分泌ＩＦＮ－γ的肿瘤细胞可用于制备新型瘤苗，探索用于肿瘤的基因治疗。