一株赤潮甲藻转录单元内间隔区(ITS)和5.8S rDNA序列的克隆

摘要

为解决分子生物学方法中因纯化的新鲜材料不足而限制实验进展的情况,采用改进的克隆方法将目的DNA片断保存在菌株中.首先应用改进的DNA提取方法从赤潮甲藻塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)中提取总核酸,以提取的DNA为模板,优化PCR扩增条件,获得转录单元内间隔区(ITS)片段.将获得的ITS片段经Sal I和Pst I双酶切后与同样经过双酶切后的质粒载体pBluscript SK+连接,转化受体菌XL1-Blue,克隆该DNA片段.该克隆方法简单易行,克隆效率完全可以满足一般实验要求.该克隆技术的应用为随时获得目的DNA提供一条途径.