钝顶螺旋藻基因组质粒文库的构建及其在获得功能基因上的应用

摘要

利用改良的SDS法提取钝顶螺旋藻基因组DNA,经Sau3AI酶切,回收1～2 kb大小的片段,与BamHI(Sau3AI的同尾酶)酶切并去磷酸化后的pBR322 质粒载体相连接,转入大肠杆菌(Escherichia coli) Top10细胞,构建了螺旋藻基因组质粒文库.根据pBR322载体上多克隆位点两侧序列设计锚定引物,根据丝状蓝藻丝氨酸/苏氨酸激酶(STK)保守序列设计简并引物,以螺旋藻质粒文库为模板,"巢式"扩增出了STK基因部分序列.螺旋藻基因组质粒文库的构建为功能基因研究提供了极大方便.