基于Armored RNA的BCR-ABL融合基因质控物研制

摘要

目的 制备以MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)为材料的BCR-ABL融合基因质控物.方法 获取临床p210型BCR-ABL融合基因骨髓标本cDNA,PCR扩增p210型BCR-ABL融合基因片段和ABL内参基因片段.将MS2噬菌体成熟蛋白基因和衣壳蛋白基因克隆于pACYCDuet-1,制成pACYC-MS2,然后将p210型BCR-ABL融合基因和ABL内参基因分别插入pACYC-MS2载体,经原核表达、分子筛纯化、反转录-PCR鉴定后分别制成包装有p210型BCR-ABL融合基因和ABL内参基因片段的病毒样颗粒(VLPs).进行稳定性、均一性检测,同时判断质控物的适用性.结果 成功制备了包装有p210型BCR-ABL融合基因和ABL内参基因的VLPs质控物.均一性检测表明质控物目的片段拷贝数水平是均一的.稳定性检测显示质控物标本在-20℃可至少稳定保存7个月,4℃稳定保存3个月,室温稳定保存15 d,37℃稳定保存1周.用实时荧光定量PCR试剂盒检测质控物水平,pACYC-MS2-p210 VLPs和pACYC-MS2-ABL VLPs标准曲线的R2分别为0.9940和0.9917,具有很好的适用性.结论 将Armored RNA作为材料所制备的BCR-ABL融合基因质控物稳定性、均一性较好,适用于评价BCR-ABL融合基因检测试剂盒的性能,具有广泛的应用前景.