葡萄糖磷酸异构酶酶显色定量测定方法的建立及性能评估

摘要

目的 建立葡萄糖磷酸异构酶(GPI)的酶显色定量测定方法.方法 D-果糖-6-磷酸二钠在GPI作用下生成葡萄糖-6-磷酸,葡萄糖-6-磷酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)作用下生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),NADH与水溶性四氮唑盐(WST-3)反应,反应产物在550 nm处有最大吸光度值,吸光度值与GPI水平呈正比.利用此原理对39例类风湿关节炎患者、52例其他自身免疫性疾病和32例健康对照者血清中GPI进行检测.同时评价该方法的线性、精密度、准确度、稳定性,并与GPI酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒进行一致性分析.结果 该方法线性良好(r2=0.9923)、精密度批内和批间变异系数均小于10％ 、准确度t检验显示各水平测试结果偏倚均可接受.试剂稳定性大于12个月,测试结果相对偏差在±20％ 以内均满足试验要求,且与GPI ELISA试剂盒相关性良好,测定结果偏差无统计学意义(P>0.05).结论 GPI的酶显色定量测定方法的各项指标均符合临床要求,可用于临床GPI水平检测.