5-LO真核表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中的表达的初步研究

摘要

目的 构建5-LO真核表达载体并初步研究其在RAW264.7细胞中的表达,为建立5-LO高表达转基因小鼠模型提供表达载体.方法 从人全血标本中提取细胞总RNA,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增5-LO基因,分别构建5-LO目的 基因的克隆载体与表达载体,提取质粒,进行酶切、PCR和DNA测序鉴定,将重组融合表达载体pEGFP-5-LO稳定转染RAW264.7细胞,RT-PCR、western blot方法检测pEGFP-5-LO的表达情况.结果 构建了重组克隆载体pUCm-5-LO和真核表达载体pEGFP-5-LO,经酶切、PCR及测序鉴定正确:转染细胞后,在荧光显微镜下观察到pEGFP-5-LO融合蛋白的表达,RT-PCR和Western blot结果表明转染pEGFP-5-LO的RAW264.7细胞中有5-LO的表达.结论 成功克隆了5-LO基因,构建的表达载体pEGFP-5-LO在RAW264.7细胞中表达5-LO蛋白,为进一步5-LO高表达转基因鼠模型的建立和临床应用奠定了基础.