miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

摘要

目的研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(miR-129-5p mimic+oe-Wnt5a组),MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Western blot检测各组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、cyclinD1、cMYC和MMP2蛋白的表达。结果与正常胆管上皮细胞系HIBEpic相比,miR-129-5p在胆囊癌细胞系中的表达降低,在胆囊癌细胞GBC-SD中的表达最低。与NC组相比,miR-129-5p mimic组胆囊癌细胞增殖和转移能力均降低。Targetscan7.1预测软件、双荧光素酶报道基因及qRT-PCR试验表明miR-129-5p靶向调控Wnt5a。与HIBEpic相比,Wnt5a在胆囊癌细胞系中的表达增加。与NC组相比,miR-129-5p mimic组、miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组和miR-129-5p mimic+oe-Wnt5a组胆囊癌细胞增殖和转移能力均降低,其中miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组最低,miR-129-5p mimic+oe-Wnt5a组最高。与NC组相比,miR-129-5p mimic组、miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组和miR-129-5p mimic+oe-Wnt5a组胆囊癌细胞β-catenin、cyclinD1、cMYC和MMP2蛋白表达均降低,其中miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组最低,miR-129-5p mimic+oe-Wnt5a组最高。结论miR-129-5p靶向调控Wnt5a表达抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力。