改良前处理的原代组织块贴壁法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞

摘要

目的 建立改良前处理的原代组织块贴壁法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs).方法 将SD大鼠经颈椎脱臼处死断头后放入盛有75％酒精的烧杯中浸泡消毒.在无菌条件下剖开胸腹腔,取出大鼠的心肺组织,然后用非体式显微镜分离方法分离出肺动脉血管段,去除肺动脉血管外层纤维结缔组织、破坏血管内膜层内皮细胞后,用组织块贴壁法培养PASMCs,并传代、冻存和复苏,倒置相差显微镜观察细胞形态,普通免疫细胞化学法和免疫荧光法进行细胞鉴定.结果 大鼠PASMCs呈典型的“峰-谷”样生长状态,细胞形态呈梭形.α-SM actin蛋白在培养的大鼠PASMCs为阳性表达,传至第4代的PASMCs成活率可达98％,生长形态未见异常改变.PASMCs细胞从-80℃冰箱中取出复苏后,生长状态良好,形态、结构稳定.结论 用改良前处理的组织块贴壁法能够成功培养PASMCs,较传统组织块贴壁法更简单,培养效率高.