结核分枝杆菌包涵体蛋白Rv3480c的克隆、表达与纯化

摘要

目的 应用分子生物学技术对结核分枝杆菌重组抗原Rv3480c基因进行克隆、表达和纯化.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增,克隆Rv3480c基因片段,产物经验证后与载体质粒pET28a连接重组质粒,将验证构建成功的重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌体内,经异丙基半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,溶解包涵体,并通过多次低温冻融、不同浓度尿素复性方法进行包涵体蛋白质的纯化.结果 扩增后基因电泳试验及测序证实成功重组目的基因,用尿素溶液和磷酸盐缓冲液(PBS)透析和纯化重组蛋白,Western-Blot证实成功重组结核分枝杆菌抗原Rv3480c.结论 应用分子生物学技术成功获得结核分枝杆菌Rv3480c蛋白,为其结构和功能的进一步研究奠定了基础,并为包涵体蛋白的纯化提供了新的技术思路.