沉默ClC-3氯通道基因对PC-12细胞凋亡的影响

摘要

目的:观察氯离子通道蛋白3(ClC-3)基因沉默对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC-12凋亡的影响.方法:取处于对数生长期的PC-12细胞,随机分为4组:对照组(用正常培养基培养)、H2O2组(用300 nmol/L H2O2诱导12h)、H2O2+空质粒组(细胞转染pGPU6/GFP 24 h后用H2O2诱导12 h)、H2O2+siRNA组(细胞转染pGPU6/GFP-ClC-3-siRNA 24 h后用H2O2诱导12 h).通过CCK-8检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测Caspase-3以及ClC-3蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测ClC-3 mRNA的表达.结果:与对照组比较,H2O2组、H2O2+空质粒组和H2O2+ siRNA组均表现为细胞存活率下降,细胞凋亡增加,ClC-3 mRNA和Caspase-3、ClC-3蛋白表达增加(P＜0.05);H2O2组和H2O2+空质粒组比较,各指标差异无统计学意义(P＞0.05);但与H2O2组、H2O2+空质粒组比较,H2O2+siRNA组细胞存活率较高,细胞凋亡率较低,ClC-3 mRNA和Caspase-3、ClC-3蛋白表达较弱(P＜0.05).结论:ClC-3氯离子通道参与了H2O2诱导的PC-12细胞凋亡.