七叶一枝花ISSR-PCR反应体系的建立

摘要

利用单因素试验和正交设计试验相结合的方法,优选七叶一枝花Paris polyphylla稳定的简单重复序列间扩增-聚合酶链式反应（ISSR-PCR）反应体系.最终建立了稳定性高,重现性好,检测多态性能力强的ISSR-PCR最佳反应体系,即25.0 μL反应体系中各因素的浓度分别为：dNTPs 0.2 mmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.75×16.67 nkat（0.75 U）,引物0.6 μmol· L-1,Mg2＋ 2.0 mmol·L-1,模板DNA 40 ng,引物ISSR2最适退火温度为52℃.研究结果为后续的七叶一枝花种质资源鉴定和遗传多样性研究奠定了技术基础.