ELISA方法研究多糖与人干扰素-γ相互作用

摘要

目的:建立一种体外研究多糖与干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)相互作用的ELISA方法.方法:在硼氰氢化钠作用下合成肝素-牛血清白蛋白复合物(Heparin-BSA Complex,HBC),Sepharose 4B凝胶过滤系统分离纯化HBC,并用SDS-PAGE鉴定.将HBC(相当于0.5 μg蛋白含量)包被在酶标板上,ELISA方法检测HBC与IFN-γ的相互作用,并探讨游离肝素、低分子量肝素、硫酸软骨素A、硫酸软骨素C和透明质酸,以及卡拉胶等多糖对这种结合的影响.结果:IFN-γ与HBC的结合呈IFN-γ剂量依赖性,2 ng左右达到饱和.游离肝素和低分子量肝素以及其他多糖均不同程度地抑制了IFN-γ与HBC的结合,肝素和低分子肝素的IC50分别为2.4 μg/ml和18.6 μg/ml.结论:IFN-γ与肝素、卡拉胶高亲和力结合,而与硫酸软骨素A、硫酸软骨素C、透明质酸结合力极弱.ELISA是一个简单、灵敏的研究细胞因子与多糖相互作用的方法.