金黄色葡萄球菌fnbA和fnbB基因及fnbAB双基因缺失突变体菌株的构建

摘要

目的 构建纤维连接蛋白结合蛋白(fibrinogenbinding proteins,FnbP)基因fnbA 、fnbB及fnbAB基因敲除质粒并构建相应基因缺失金黄色葡萄球菌菌株.方法 提取金黄色葡萄球菌NCTC8325菌株的基因组,以合成的含有GGGG-attB1的基因特异性序列为引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术分别扩增目的基因片段,应用Gateway基因克隆技术,通过BP反应与含有attP1和attP2的pKOR1质粒载体混合,在attB和attP之间发生位点特异性重组,构建成含有fnbA fnbB和fnbAB基因敲除质粒,再电转到金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325.结果 构建质粒pKOR1dfnbA、pKOR1dfnbB和pKOR1dfnbAB经PCR验证并测序结果正确,经PCR验证,基因缺失质粒pKOR1dfnbA、pKOR1dfnbB和pKOR1dfnbAB均成功电转入金黄色葡萄球菌NCTC8325菌株.结论 成功构建fnbA、fnbB和fnbAB基因敲除金黄色葡萄球菌菌株NCTC8325,为研究FnBPA和FnBPB在金黄色葡萄球菌感染机制中的作用提供了有力工具.