氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF_(165)基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定

摘要

目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)。分离培养S-D大鼠心肌细胞,转染rAAV,细胞固定后做免疫细胞荧光染色,检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白的表达。结果pAAV-HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定,结果与NCBI GenBank公布的人VEGF165cDNA核苷酸序列(AB021221)完全一致,含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功,可感染原代培养的大鼠心肌细胞,缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV-HRE9-hVEGF165载体,可有效转染心肌细胞,VEGF165基因的适时表达,为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。