16S rRNA基因多变区序列对不同种属钩端螺旋体的PCR扩增

摘要

从问号状钩体16S rRNA基因多变区V2和V4序列中设计了一对引物:PⅠ 5’GGGAAC CTA ATA CTG GAT GG;PⅡ 5’ACA TAG TTT CAA GTG GAG GC,并对不同种属钩体DNA进行了扩增。在55℃退火条件下,问号状钩体各群型具有相同大小的扩增产物(473bp)和KpnⅠ酶谱,双曲钩体有约280bp的扩增带,但不被KpnⅠ酶消化,而细丝体属钩体和其它对照DNA未见扩增。以^(32)P标记的lai型Lai株(强毒)扩增产物作探针行Southern杂交发现,问号状钩体各株扩增带均可被杂交,而双曲钩体扩增物无杂交。研究表明,该对引物可用于钩体的分类和检测。