重组anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非复制型逆转录病毒的构建

摘要

目的:构建pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ的重组真核表达载体,转染PA317细胞株,包装制备重组非复制型逆转录病毒。方法:采用DNA重组技术把pBULLET上的CD28-ζcDNA插入到已含anti-CD20 scFv/CD80的真核逆转录病毒载体pLNCX质粒上,转染PA317细胞株,经G418筛选,收获上清液获非复制型逆转录病毒,将病毒感染NIH3T3细胞株,用PCR、流式细胞术检测目的基因在NIH3T3细胞中的表达情况,确定病毒滴度。结果:经酶切及测序鉴定均证实pLNCX/anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ的成功构建;采用PCR方法能够从逆转录病毒感染的NIH3T3细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段;流式细胞术检测显示该目的基因能够在NIH3T3细胞中表达目的蛋白。结论:成功构建高滴度表达anti-CD20 scFv/CD80/CD28/ζ非复制型逆转录病毒,并能在NIH 3T3细胞中表达目的蛋白。