TauT转基因大鼠的构建及鉴定

摘要

目的:为研究牛磺酸转运体(TauT)在神经系统疾病中的作用,构建并繁育脑特异性表达TauT转基因模型大鼠(TauT+/-大鼠)。方法:将TAUT cDNA插入脑特异性PDGF启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立TAUT转基因大鼠。Genotype鉴定转基因大鼠的基因型。经过配种繁殖和鉴定后,绘制2~8月龄生长曲线、测定各脏器质量、脏体系数和脏脑系数;RT-PCR技术检测TauT+/-大鼠大脑组织中Slc6a6 mRNA基因表达水平;Western blot检测TauT+/-大鼠在大脑、心、肝组织的TauT蛋白表达,并对TauT+/-大鼠大脑组织进行免疫组化染色和HE染色,IPP软件对免疫组化图像进行处理。结果:成功构建PDGF-Slc6a6表达质粒,得到3只TauT+/-大鼠F0代。经过繁殖和鉴定,与同窝阴性大鼠(TauT-/-大鼠)比较,TauT+/-大鼠大脑组织Slc6a6 mRNA基因表达水平显著升高,大脑、心、肝组织TauT蛋白表达水平没有显著性差异,HE染色和免疫组化结果显示TauT+/-大鼠脑组织海马区和皮层区未见异常,TauT蛋白表达没有显著性差异。结论:成功构建TauT转基因大鼠品系,为后续研究TauT在大脑中的作用提供一种较好的动物模型。