人类端粒酶活性重组及其重组特异性

摘要

【目的】对Hela细胞端粒酶进行活性重组并探讨其重组特异性。【方法】以RT PCR法从纯化的人端粒酶复合体中扩增人类端粒酶RNA(hTR)基因片段 ,将其克隆至含有SP6启动子的 pGEM 3f+质粒中 ,构建hTR的体外转录体系以获得体外合成的hTR。与端粒酶蛋白组分进行活性重组。四膜虫端粒酶RNA及 16SrRNA作为重组反应对照组 ,以探测其重组特异性。【结果】经RT PCR扩增出 45 0bp片段 ;体外转录重组载体经酶切图谱和PCR扩增鉴定构建成功 ;体外转录的RNAs经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了鉴定 ;活性重组实验中 ,对照组的MNase处理但未作重组管为阴性 ;3组重组管中 ,经MNase处理后的端粒酶蛋白特异性地与经体外转录所得的人端粒酶RNA组分重组而重获端粒酶活性 ,与四膜虫端粒酶RNA及 16SRNA重组均不能获得酶活性 ,说明端粒酶复合体有自身不可替代的组成成分 ,而且不同生物体的端粒酶有各自特异的酶蛋白组分和RNA组分。【结论】Hela细胞端粒酶蛋白组分能特异地与体外合成的hTR重组端粒酶活性。