CCC2基因缺陷型酵母对中国人Wilson病突变热点致病性的研究

摘要

[目的]应用CCC2基因缺陷型酵母研究中国人Wilson病(Wilson disesse,WD)突变热点Arg778Leu的致病性,在蛋白水平上探讨中国人Wilson病的发病机制.[方法]应用RT-PCR和TOPO TA克隆技术分段克隆ATP7B的全长cDNA,USE定点诱变技术制备突变体,应用酵母功能互补分析的方法研究Arg778Leu的致病性.[结果]本研究应用USE定点诱变技术成功制备了ATP7B的Arg778Leu突变体,在CCC2缺陷型酵母内表达人的野生型ATP7B可以弥补酵母内CCC2蛋白的运铜功能,使CCC2缺陷型酵母在铜、铁及亮氨酸缺陷型培养基上生长良好;对突变体的研究表明Arg778Leu只能部分代偿CCC2蛋白的运铜功能.[结论]本试验证明CCC2基因缺陷型酵母是研究人ATP7B的一种良好的细胞模型,证明了中国人WD的常见突变Arg778Leu是一种致病性的突变.