miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移

摘要

目的 探讨miR-let-7c-5p能否调控HMGA2抑制膀胱癌细胞侵袭和迁移.方法 生物信息学方法确定miR-let-7c-5p的关键基因;RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌和癌旁组织中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白相对表达量.以人正常膀胱细胞SV-HUC-1作为对照,RT-qPCR和Western blot检测膀胱癌细胞系T24,UM-UC-3,5637细胞中miR-let-7c-5p mRNA和HMGA2蛋白的相对表达量.对UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p分别进行上调和下调,上调实验设模拟物阴性对照组(mimic NC)、miR-let-7c-5p模拟物组(mimicmiR-let-7c-5p)、下调实验设阴性对照组(inhibitor NC)及miR-let-7c-5p抑制剂组(si-miR-let-7c-5p),双荧光素酶实验、RT-qPCR和Western blot法共同验证miR-let-7c-5p和HMGA2的靶向关系;Transwell小室检测单独上调或下调miR-let-7c-5p表达及同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移的变化;Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail)相对表达量.结果 HMGA2为miR-let-7c-5p的靶基因之一;与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-let-7c-5pmRNA相对表达量降低(P<0.05),HMGA2蛋白相对表达量增加(P<0.05);与SV-HUC-1细胞相比,UM-UC-3细胞中miR-let-7c-5p相对表达量显著降低,HMGA2显著增加(P=0.01).上调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著下降(P<0.05);下调miR-let-7c-5p表达,UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力均显著增加(P<0.05);当同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达UM-UC-3细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05).Western blot结果显示,上调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达增加,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达下降;下调miR-let-7c-5p表达,E-cadherin表达下降,N-cadherin,vimentin,Snail蛋白表达增加;同时下调miR-let-7c-5p和HMGA2表达能够抑制UM-UC-3细胞EMT(P<0.05).结论 miR-let-7c-5p通过靶向HMGA2抑制EMT进而抑制UM-UC-3细胞侵袭和迁移.