构建EGFP-PDX-1融合表达载体电穿孔转染大鼠胎肝干细胞的研究

摘要

目的构建PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染入大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达.方法从SK900/BLSCRIPT质粒中扩增PDX-1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP-C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转染;分析转染前后细胞生长曲线,荧光显微镜下观察、RT-PCR鉴定转染结果.结果重组质粒经酶切鉴定正确无误,经电穿孔转染后GFP和PDX-1基因均能在胎肝干细胞中保持较长时间稳定表达,并对胎肝干细胞的生长增殖影响较小.结论成功构建了PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,能在胎肝干细胞中较稳定表达,为研究PDX-1在干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞中的调控作用提供了物质基础.