雷公藤ISSR反应体系的建立与优化

摘要

【目的】建立适合雷公藤的ISSR-PCR反应体系，为雷公藤种质资源的亲缘关系鉴定和遗传多样性分析提供技术支持。【方法】采用单因素试验设计优化影响雷公藤ISSR-PCR扩增效果的TaqDNA聚合酶、dNTPs、Mg2+、引物浓度和DNA模板含量及退火温度，并以32份雷公藤样品对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证。【结果】优化的雷公藤种质资源ISSR-PCR反应体系为：20.00μL反应液中含1.50UTaqDNA聚合酶、0.30mmol/LdNTPs、2.00mmol/LMg2+、0.40μmol/L引物、20ngDNA模板和2.00μL10×Buffer。ISSR-PCR扩增程序中最佳退火温度为54.7℃。【结论】建立优化的雷公藤ISSR-PCR反应体系具有较高的稳定性、重现性和适用性，可应用于雷公藤不同地理种源间的遗传多样性鉴定。