人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立

摘要

目的　建立人脐动脉血管平滑肌细胞 (HU ASMC)原代、传代培养的最佳方法 ,并初步建立其永生株。方法　采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养 ,比较不同培养基对原代及传代细胞增殖的影响 ;选择标记为新霉素 (G4 18)的带有端粒酶催化亚基 (h TERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞。结果　经 α-肌动蛋白鉴定 ,组织块贴壁法可获得高纯度的 HUASMC。原代培养的 HU ASMC1～ 4代细胞增殖能力强、生长旺盛 ,此后细胞的增殖能力逐渐降低 ,到第 10代几乎丧失增殖力。原代培养以 MCDB131为最佳培养基。 h TERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形 ,接触抑制消失 ,生长速度快 ,目前已传至 2 0代 ,增殖能力与第 1代无差别。转染前后平滑肌特异的α-肌动蛋白表达阳性。结论　 h TERT转染的 HU ASMC保留了 HU ASMC的基本生物学特征 。