法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库的构建和初步鉴定

摘要

目的 构建法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库并初步鉴定. 方法 利用Trizol法抽提法国梧桐花粉总RNA,经过Oligo(dT)纤维素柱纯化后分离mRNA,反转录合成ds cDNA,连接EcoR Ⅰ接头,末端磷酸化,Xho Ⅰ消化,电泳分离并凝胶回收大于500 bp以上的cDNA片段,与Uni-ZAP XR Vector连接,经过体外包装,感染宿主菌,构建cDNA文库,检测文库容量和重组率,并采用PCR方法对插入的cDNA片段大小进行分析. 结果 成功构建了一个文库容量为3.5×106 pfu/ml,重组率为94％,平均插入片段长度约为0.7 kb的法国梧桐花粉变应原cDNA表达文库. 结论 所建文库容量及插入片段大小合适,适用于筛选目的cDNA,为进一步研究法国梧桐花粉主要变应原基因并制备重组标准化法国梧桐花粉主要变应原疫苗奠定基础.