miR-141表达抑制增强结肠癌细胞对5-Fu药物敏感性的研究

摘要

目的 建立人结肠癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株,并探讨miR-141靶向作用PPP2 R1B介导结肠癌细胞对5-Fu耐药的机制. 方法 通过药物敏感性实验,选取5-Fu敏感细胞COLO-320细胞株采取大剂量冲击联合剂量递增法,诱导筛选5-Fu耐药结肠癌细胞株,稳定传代.四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测耐药细胞和亲本细胞的半数抑制浓度(IC50).PCR的微阵列技术比较亲本细胞和5-Fu耐药细胞差异表达的miRNA分子,从中筛选出1个差异表达的miR-141分子.利用数据库Targetscan和miRBase database预测miR-141的靶基因为PPP2R1B,利用双荧光素酶报告基因检测进行鉴定.基因敲除miR-141后分析miR-141对PPP2R1B的调控作用. 结果 COLO-320细胞株经大剂量冲击联合剂量递增的方法诱导后可在5.0μmol/L的5-Fu培养液中稳定增殖,具有耐药性,命名为COLO-320/5-Fu,该细胞株5-Fu的IC50显著高于亲代细胞(P＜0.05).芯片结果显示共有13个miRNAs在耐药细胞株中差异性表达,其中miRNA-141表达增加最为显著(P＜0.05).敲除该miR-141后,耐药细胞的5-Fu敏感性显著增加,凋亡比例增加(P＜0.05).结果显示,PPP2R1B为miR-141的靶基因,miRNA-141表达抑制显著上调PPP2R1B的表达水平并进而影响Akt磷酸化过程. 结论 本实验成功构建COLO-320/5-Fu耐药细胞株,miR-141可能通过靶向调控PPP2R1B,进而参与调控结肠癌细胞对5-Fu的耐药.