嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子的制备工艺优化

摘要

研究旨在优化嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌的原生质体制备工艺来获得融合子,为产芽孢乳酸菌的育种和改良提供新的思路.通过单因素试验考察菌龄、溶菌酶浓度、酶解温度和时间对原生质体形成率和再生率的影响,并在此基础上,以原生质体形成率为指标,通过正交试验优化原生质体制备工艺.结果表明,菌龄和酶解时间对原生质体形成率影响较大,其次为酶解温度和溶菌酶浓度.嗜酸乳杆菌原生质体制备的最优工艺为取培养12 h的对数生长中后期菌体用5.0 mg/mL溶菌酶37°C酶解30 min;地衣芽孢杆菌则取培养8 h(对数生长中后期)的菌体用2.5 mg/mL溶菌酶37°C酶解3 h.在上述条件下制备亲代细胞的原生质体,以PEG6000促融,嗜酸乳杆菌和地衣芽孢杆菌的原生质体融合率分别为4.6×10-6和3.8×10-6.原生质体制备工艺的优化是嗜酸乳杆菌-地衣芽孢杆菌融合子制备及获得高融合率的关键,融合子的获得可为筛选既能形成芽孢又可产蛋白酶和淀粉酶的高性能乳酸菌菌株奠定基础.