兔透明带蛋白ZPB(RC55)DNA疫苗PCMV4-RC55的构建及其在兔的免疫反应

摘要

本实验以兔ZPB作为免疫抗原，利用DNA疫苗技术进行兔免疫避孕疫苗的研究。利用EcoRI内切酶将PGEM-RC55的兔ZP基因RC55亚克隆至pBluescript载体，再经HindIII/Xbal双酶切后，将RC55基因构建至真核表达质粒载体PCMV4，得到PCMV4-RC55。在PCMV4-RC55 DNA疫苗免疫新西兰兔的实验中，设雌兔实验组及雄兔实验组，以Bupivacaine-HCL为辅助剂进行大腿肌肉注射，24 h后在相同部位注射250 μg PCMV4-RC55 DNA，并在第4周免疫加强一次。分别于注射PCMV4-RC55前及注射后第2、4、5、6、7、8周耳静脉取血，收集血清，采用ELISA法检测新西兰兔产生抗ZP-RC55抗体水平。检测结果表明，PCMV4-RC55 DNA疫苗能诱导雌兔和雄兔产生免疫应答，抗体滴度最高可达1∶8 000，滴度维持在1∶4 000水平能持续两个月以上。