miR-128真核表达载体的构建及功能的初步研究

摘要

目的 构建miR-128真核表达载体,研究其在神经胶质瘤细胞株U343表达及对U343细胞增殖的影响.方法 以人神经胶质瘤细胞株U343的DNA为模板扩增miR-128-1和miR-128-2的前体序列,将人miR-128-1(has-miR128-1)和人miR-128-2(has-miR128-2)基因克隆到真核表达载体pCR3.1,将pCR3.1-miR-128-1(p-128-1)和pCR3.1-miR-128-2(p-128-2)表达载体瞬时转染U343细胞,采用Northern印迹检测成熟的miR-128表达.将U343细胞接种96孔板,MTT法检测过表达miR-128对细胞增殖的影响.结果 p-128-1和p-128-2表达载体经酶切及测序鉴定正确;二者转染细胞后,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增结果显示,其能有效表达miR-128的前体;Northern印迹结果均能产生成熟态的miR-128.MTT检测结果在无血清培养和维甲酸处理的情况下,细胞的增殖能力明显下降.结论 成功构建了p-128-1和p-128-2的真核表达载体,转染神经胶质瘤细胞后能有效表达,miR-128基因过表达能抑制U343细胞的增殖.