间充质干细胞来源微囊泡对卵巢颗粒细胞的作用

摘要

目的 探讨间充质干细胞来源微囊泡(MVs)对卵巢颗粒细胞的作用. 方法 取传代第8代(P8)前的人脐带间充质干细胞进行无血清培养,超速离心结合蔗糖密度梯度离心法从培养液上清中分离纯化MVs,透射电镜形态学观察,Bradford法蛋白定量.将PKH26标记的不同浓度MVs(0、10、15、20、25μg/ml)与3周龄雌性SD大鼠卵巢颗粒细胞共培养,3h后荧光显微镜观察颗粒细胞对MVs的内化作用;48 h检测培养细胞周期各时相的变化及培养液上清中E2浓度. 结果 随培养时间的延长,MVs释放量显著增加,8×105个细胞大约释放10 μg左右的MVs,电镜下MVs呈圆形或椭圆形,直径介于30～1 000 nm之间,中间为低电子密度区.与MVs共培养3h后,颗粒细胞胞浆中可见呈红色荧光信号的MVs;不同浓度的MVs均可显著增加颗粒细胞的增殖指数(PI)、S期细胞比率(SPF)及E2水平,且呈先上升后下降趋势(P＜0.05). 结论 MVs能够被颗粒细胞摄取;人脐带间充质干细胞来源的MVs能够促进颗粒细胞增殖及分泌E2功能.